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定氮儀,細胞培養實驗—蛋白質檢測的方法

更新时间:2019/12/12 9:27:32 人氣:

蛋白質的理化性質及反應衆多,光是顯色反應就達十余種,每一種或一類性質就意味著一條檢測途徑,因此能夠用于蛋白質檢測的方法多種多樣。在衆多的蛋白質含量常規檢測方法當中,曆史最長、最爲成熟的兩種方法是基于氮元素含量測定的凱氏定氮法和燃燒定氮法;發展速度最快、無需樣品預處理的快速檢測方法首推近紅外光譜法;應用最爲廣泛、實現最爲靈活的是基于顯色反應的比色法;能夠對不同結構和大小的蛋白質分子進行分離檢測的主要有高效液相色譜法、毛細管凝膠電泳。此外,還有其它一些不常用或是非常規的方法也可用于蛋白質含量的檢測。定氮儀凱氏定氮法:凱氏定氮法是丹麥化學家Kjeldahl1883年提出的,曆經一個多世紀的發展後已逐步趨于成熟和完善。Kjeldahl發明凱氏定氮法的最初目的是檢測啤酒原料谷物中蛋白質的含量,後經多次改進檢測過程不斷簡化、檢測結果的重現性和可靠性逐步提高,最終被人們所廣泛采用。目前凱氏定氮法已成爲衆多國家和組織機構檢測蛋白質的標准方法,被各領域學者和研究人員應用于蛋白質的檢測之中。凱氏定氮法的測量原理:凱氏定氮法主要基于蛋白質中氮元素含量大致爲16%這一原理,雖然在不同的時期具體實現細節上略有不同,但大致都分爲消化、蒸餾和滴定三大步驟。



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